Статьи – НОВЫЙ МЕТОД ВИЗУАЛИЗАЦИИ МИКРОСКУЛЬПТУРЫ ПОВЕРХНОСТИ ЛИСТЬЕВ И ПЛОДОВ

НОВЫЙ МЕТОД ВИЗУАЛИЗАЦИИ МИКРОСКУЛЬПТУРЫ ПОВЕРХНОСТИ ЛИСТЬЕВ И ПЛОДОВ

Ботанический журнал №11-12 / 2019 г. – С. 1777-1791

DOI: 10.31857/S0006813619110036
База данных цитирования: Scopus

Рубрика: Методика ботанических исследований

Авторы: Бабоша А. В., Рябченко А. С., Кумахова Т. Х.

Аннотация:
Предложен простой вариант сканирующей электронной микроскопии замороженных нативных нефиксированных содержащих влагу образцов (криоСЭМ) с металлизацией поверхности при небольших отрицательных температурах. Образцы плодов яблони и груши, листьев яблони, а также листьев пшеницы, инфицированных возбудителем мучнистой росы, закрепляли на медной пластинке при помощи компьютерной термопасты, помещали на металлический держатель – накопитель холода – и охлаждали при температуре –20°С, затем напыляли золотом в камере для катодного напыления в среде аргона. Образцы исследовали в камере сканирующего электронного микроскопа, оборудованной охлаждающим столиком с температурой –25…–30°С, в условиях высокого вакуума. Предлагаемый метод дал наилучшие результаты по сравнению с напылением при комнатной температуре или без металлизации. Для изученных объектов металлизация расширила диапазон доступных для криоСЭМ максимальных увеличений с 1000× до 10 000×. Это позволило различить детали восковых и кутикулярных отложений, а также получить достаточно качественные изображения конидий и гиф на поверхности плодов и листьев.

Ключевые слова: криоСЭМ, замораживающая приставка, термопаста, металлизация биологического образца, Blumeria graminis f. sp. tritici, Malus domestica Borkh., Pyrus communis L.

Название на английском: NEW METHOD OF VISUALIZATION OF THE SURFACE MICROSCULPTURE OF LEAVES AND FRUITS

Аннотация на английском:
Scanning electron microscopy (SEM) is the main method for studying the surface of biological objects that allows to obtain images with a large depth of focus. One of the SEM options is a microscopy of frozen moisture-containing samples in a state close to native (cryoSEM). An additional modification of cryoSEM, which consists in vacuum deposition of a thin metal layer on the surface of moisture-containing tissues at low temperatures, provides high image quality at high magnifications; however, it requires complex special equipment for its implementation. The simplest cryoSEM method with metallization of a sample at relatively low negative temperatures is proposed. In this work, we used samples of apple and pear fruits, apple leaves, and wheat leaves infected with powdery mildew. The explants mounted on a copper plate using a computer thermal paste were placed on a metal holder – a cold store – and cooled at a temperature of –20°С. Frozen samples together with the holder were placed in a chamber for cathodic sputtering of gold and metallized in argon. The samples were examined in the chamber of a scanning electron microscope equipped with a cooling table with a temperature of –25…–30°С, under high vacuum. For the majority of biological objects studied, the proposed cryoSEM with metal sputtering and the use of a backscattered electron detector (QBSD) gave the best results compared to sputtering at room temperature or without metallization. At relatively small magnifications, the metal layer provided greater clarity, contrast and better image detail, which justified a certain complication of the technique. For the studied objects, metallization expanded the range of maximum magnifications available for cryoSEM from about 1000× to 10 000×. This made it possible to discern the details of wax and cuticular deposits, as well as to obtain sufficiently high-quality images of conidia and hyphae on the surface of fruits and leaves.

Ключевые слова на английском: cryoSEM, freezing attachment, thermal compound, metallization of a biological sample, Blumeria graminis f. sp. tritici, Malus domestica Borkh., Pyrus communis L.

Скрытая запись: нет

Ботанический журнал - Статьи - НОВЫЙ МЕТОД ВИЗУАЛИЗАЦИИ МИКРОСКУЛЬПТУРЫ ПОВЕРХНОСТИ ЛИСТЬЕВ И ПЛОДОВ

Просмотреть
Добавить
Копировать
Редактировать
Удалить
Нет результатов